جداسازی، همسانه سازی و بیان ژن کنترل کننده پروتئین خارج غشایی omp 31 از منشأ brucella melitensis، مقدمه ای برای تولید واکسن بروسلوز

بروسلوز با بیش از نیم میلیون مورد گزارش سالانه بیماری، از شایع ترین بیماری های مشترک بین انسان و دام می باشد. در جهت ساخت واکسنی ایمن و بدون عوارض جانبی بر علیه این بیماری، کلونینگ ژن یکی از شاخص های مهم ایمنی زایی به نام omp31 در باکتری اشریشیا کلی به عنوان هدف این مطالعه در نظر گرفته شد. در این پژوهش پس از جداسازی و تکثیر قطعه ژنیomp31 از باکتری بروسلا ملی تنسیس سویه ی revi با استفاده از روش pcr، این ژن برای درج در ناقل بیانی pet32b(+) آماده گردید. سپس سازه ژنی pet32b(+)-omp31 به داخل باکتری اشریشیا کلی سویه bl21 وارد شد. برای تولید پروتئین از القا پلاسمید توسط iptg استفاده گردید. پروتئین نوترکیب توسط متیل افینیتی کروماتوگرافی ni-nta خالص گردیده و به روش براد فورد میزان آن تعیین گردید. ترادف نوکلئوتیدی ژن کلون شده در ناقل pet32b(+) با ژن omp31 بروسلا ملی تنسیس مطابق بود. پروتئین نوترکیب omp31 بصورت یک فیوژن پروتئین با وزن مولکولی 47 کیلو دالتون و با 6x his tag در دو انتها، عمدتاً در فاز نامحلول، بیان گردید. در شرایط بهینه برای تولید پروتئین، ، عملکردی در حدود 0/4 میکروگرم پروتئین خالص به ازای 20 میلی لیتر محیط کشت بدست آمد. پروتئین نوترکیب omp31 در باکتری اشریشیا کلی به صورت یک پروتئین فیوژن تولید و خالص گردیده و جهت مطالعات بیوشیمیایی و آنتی ژنیک بعدی در اختیار است.